在分子實驗室中減少污染的10種方法
admin 2020-02-03 13:45:41 943閱讀
在這里,我們討論了控制或最小化分子實驗室污染的十種方法。實驗室家具實驗室按歸屬可分為三類:第一類是從屬于大學(xué)或者是由大學(xué)代管的實驗室;第二類實驗室屬于國家機構(gòu),有的甚至是國際機構(gòu);第三類實驗室直接歸屬于工業(yè)企業(yè)部門,為工業(yè)技術(shù)的開發(fā)與研究服務(wù)。實驗臺對于生物、醫(yī)藥、涂料實驗室及潔凈間而言,徹底的清潔和消毒是首先要考慮的功能,這就要求實驗室家具具有易清潔,消毒并能夠較長時間保持潔凈的特點。而普通的鋼制和木制家具則很難滿足這種潔凈度的要求。實驗中央臺可做島形,四周都有走道便于工作人員活動并可以快速接近緊急設(shè)備或出口,當(dāng)實驗室兩側(cè)或兩端有確定的出口時可采用半島形實驗臺,而單間實驗室通常采用靠墻實驗臺在中間留通道。內(nèi)凹形工作臺讓工作人員長時間工作也會舒適,采用此方案,他們工作時可以使腳放在地上或腳位上以保持平衡,挺直身體,同時,人坐在內(nèi)凹形實驗臺邊,也可以為實驗室留出更大的活動空間。
污染的預(yù)防始于構(gòu)建或建立PCR實驗室。PCR檢測應(yīng)至少指定兩個區(qū)域:PCR前和PCR后。應(yīng)指定一個房間或區(qū)域進行預(yù)PCR。理想情況下,該房間應(yīng)進一步分為兩個區(qū)域:制備PCR主混合物和添加樣品制備/主混合物。
通過使用死空氣罐(DAB)用UV光,可以與樣品中加入單獨制備主混合物。 DAB具有以制備主混合物所需的特殊消耗品和小型設(shè)備(離心,渦流管,移液管,提示和管)。
樣品制備可涉及手動或自動提取。樣品制備所需的消耗品和小型設(shè)備(小型離心機,渦流管,移液器,吸頭和管等)可以放在臺式,另一個DAB或生物安全柜(BSC)中,具體取決于您正在使用的樣品。該區(qū)域還可用于將樣品添加到PCR主混合物中。
應(yīng)該有用于存儲盒的專用冰箱/冷凍器,另一個用于存儲樣品。
我們應(yīng)當(dāng)建立第二個房間(PCR后)和擴增后一步進行分析。這個室應(yīng)獨立的PCR前室。腔室后是用于擴增的熱循環(huán)儀和PCR后的器械的任何期望的位置處的PCR分析。理想情況下,DAB用于該區(qū)域,PCR擴增后的任何的操作的開口管所需的步驟中使用。小設(shè)備和PCR后要產(chǎn)生所需的消耗品接收DAB(微量離心,渦流泵,吸液管,提示和管)。
2.環(huán)境控制
這兩個區(qū)域(預(yù)PCR和后PCR)應(yīng)該具有獨立的環(huán)境控制,而不是使用常見的管道系統(tǒng)進行空調(diào)。此外,兩個房間都應(yīng)配備氣鎖門。注意:如果無法為PCR前和PCR后工作建立物理屏障或單獨的房間,應(yīng)盡一切努力將工作區(qū)域盡可能遠地設(shè)置。實驗室技術(shù)人員應(yīng)將這兩個工作區(qū)視為處于不同的房間。應(yīng)注意在每個區(qū)域佩戴不同的個人防護裝備(PPE)。
3.單向工作流程
在預(yù)PCRPCR之后,分子實驗室的工作流程只應(yīng)朝著一個方向繼續(xù)進行。PCR主要混合試劑和可能含有PCR模板的樣品只能在PCR預(yù)室中制備。
經(jīng)受在含有擴增子后室(所述模板的擴增)管PCR擴增,以及前不應(yīng)該被打開或引入在任何情況下PCR室。擴增子為模板,進行PCR反應(yīng)的將來,很容易PCR污染或樣品制備試劑,消耗品或設(shè)備。
這意味著,在未經(jīng)徹底凈化的情況下,引入PCR后室的消耗品和PPE(實驗室外套,手套,護目鏡等)不應(yīng)放回PCR前室。
當(dāng)從一個房間移動到另一個房間時,實驗室技術(shù)人員必須記住更換PPE。理想的是,后PCR操作的技術(shù)人員不應(yīng)該返回到預(yù)PCR進行工作。如果必須違反單向工作流,則應(yīng)小心更換PPE。


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